一、實驗器材及試劑

　　1、實驗器材

　　2、主要實驗試劑

　　二、石蠟切片免疫熒光實驗步驟

　　1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。

　　2、抗原修復：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH9.0)的修復盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸，此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。(修復液和修復條件根據(jù)組織來確定)

　　3、加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))

　　4、加二抗：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

　　5、DAPI復染細胞核：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

　　6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

　　7、鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。